阿拉伯vps

1、請問誰知道2007年7月份的足球彩票比賽日程及其對戰資料.

第07045期
美洲杯1 秘魯 玻利維亞 07/07/04
2 委內瑞拉 烏拉圭 07/07/04
3 墨西哥 智利 07/07/05
4 巴西 厄瓜多 07/07/05
瑞超 12 5 索爾納 特雷勒堡 07/07/04
6 赫爾辛堡 哈馬比 07/07/05
巴甲 9 7 米涅羅競技 弗拉門戈 07/07/04
8 利斯菲 科林蒂安 07/07/04
9 瓦斯科達伽馬 桑托斯 07/07/04
10 巴拉納競技 諾蒂卡 07/07/04
11 弗魯米嫩塞 巴拉納 07/07/04
12 格雷米奧 尤文圖德 07/07/04
13 帕爾梅拉斯 美洲 07/07/04
14 聖保羅 巴西國際 07/07/04
替補 巴甲 9 1 費古埃倫斯 克魯塞羅 07/07/04
2 戈伊亞斯 博塔弗戈 07/07/04
最早比賽開始時間：07/07/04..01：00
開售時間：07/07/01..20：00 停售時間：07/07/03..22：15 計獎時間：07/07/05..14：00

第07046期 亞洲杯 1 泰國 伊拉克 07/07/07
2 澳大利亞 阿曼 07/07/08
3 越南 阿聯酋 07/07/08
瑞超 13 4 佐加頓斯 馬爾默 07/07/07
5 奧雷布洛 哈爾姆斯達斯 07/07/08
巴甲 10 6 米涅羅競技 格雷米奧 07/07/08
7 科林蒂安 弗魯米嫩塞 07/07/08
8 桑托斯 克魯塞羅 07/07/08
9 戈伊亞斯 利斯菲 07/07/08
10 巴西國際 費古埃倫斯 07/07/08
11 尤文圖德 瓦斯科達伽馬 07/07/08
12 諾蒂卡 帕爾梅拉斯 07/07/08
芬超 11 13 庫迪皮 TPS土爾庫 07/07/08
14 vps瓦薩 英特土爾庫 07/07/08
芬超 11 邁帕 坦佩雷 07/07/08
最早比賽開始時間：07/07/07..20：35
開售時間：07/07/04..20：00 停售時間：07/07/07..19：50 計獎時間：07/07/09..10：00

第07047期 亞洲杯1 烏茲別克 馬來西亞 07/07/14
2 沙烏地阿拉伯 印度尼西亞 07/07/14
3 中國 伊朗 07/07/15
4 巴林 韓國 07/07/15
瑞超 14 5 特雷勒堡 加爾斯 07/07/14
6 赫爾辛堡 哥德堡 07/07/15
巴甲 11 7 格雷米奧 帕爾梅拉斯 07/07/15
8 桑托斯 博塔弗戈 07/07/15
9 利斯菲 米涅羅競技 07/07/15
10 美洲 巴西國際 07/07/15
11 科林蒂安 聖保羅 07/07/15
12 克魯塞羅 戈伊亞斯 07/07/15
芬超 12 13 馬里漢姆 奧盧 07/07/15
14 VPS瓦薩 拉赫蒂 07/07/15
替補 注意：由於本期亞洲杯、瑞超、巴甲和芬超無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/14..18：20
開售時間：07/07/12..20：00 停售時間：07/07/14..17：35 計獎時間：07/07/16..10：00

第07048期 亞洲杯 1 印度尼西亞 韓國 07/07/18
2 沙烏地阿拉伯 巴林 07/07/18
3 馬來西亞 伊朗 07/07/18
4 烏茲別克 中國 07/07/18
瑞超 14 5 哈馬比 卡爾馬 07/07/19
巴甲 12 6 費古埃倫斯 利斯菲 07/07/19
7 米涅羅競技 美洲 07/07/19
8 巴拉納競技 尤文圖德 07/07/19
9 巴西國際 科林蒂安 07/07/19
10 諾蒂卡 克魯塞羅 07/07/19
11 聖保羅 弗魯米嫩塞 07/07/19
12 弗拉門戈 巴拉納 07/07/20
13 戈伊亞斯 格雷米奧 07/07/20
14 帕爾梅拉斯 桑托斯 07/07/20

替補 注意：由於本期亞洲杯、瑞超和巴甲無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/18..18：20
開售時間：07/07/15..20：00 停售時間：07/07/18..17：35 計獎時間：07/07/20..10：30

第07049期 亞洲杯 1 B組第一 * A組第二 * 07/07/21
2 A組第一 * B組第二 * 07/07/21
3 C組第一 * D組第二 * 07/07/22
4 D組第一 * C組第二 * 07/07/22
挪超 14 5 布蘭 斯塔貝克 07/07/23
6 費德列斯達 利勒斯特羅姆 07/07/23
7 奧德格陵蘭 斯托姆加斯特 07/07/23
8 羅森博格 維京 07/07/23
9 桑德菲奧德 利恩 07/07/22
10 斯達 阿勒桑 07/07/23
巴甲 13 11 美洲 巴拉納競技 07/07/22
12 尤文圖德 巴西國際 07/07/22
13 瓦斯科達伽馬 米涅羅競技 07/07/22
14 科林蒂安 諾蒂卡 07/07/23

替補 巴甲 13 1 克魯塞羅 聖保羅 07/07/23
2 弗魯米嫩塞 戈伊亞斯 07/07/23
最早比賽開始時間：07/07/21..18：20
開售時間：07/07/19..09：30 停售時間：07/07/21..17：35 計獎時間：07/07/23..10：00
註：我中心將在此期彩票開售前確認帶「*」球隊名稱。

第07050期 亞洲杯 1 第07049期序號1勝者* 第07049期序號2勝者* 07/07/25
2 第07049期序號3勝者* 第07049期序號4勝者* 07/07/25
芬超 14 3 洪卡 哈卡 07/07/25
4 赫爾辛基 邁帕 07/07/26
巴甲 14 5 巴拉納競技 克魯塞羅 07/07/26
6 戈伊亞斯 桑托斯 07/07/26
7 弗拉門戈 美洲 07/07/26
8 諾蒂卡 格雷米奧 07/07/26
9 費古埃倫斯 科林蒂安 07/07/26
10 巴西國際 巴拉納 07/07/26
11 帕爾梅拉斯 瓦斯科達伽馬 07/07/26
12 米涅羅競技 弗魯米嫩塞 07/07/27
13 博塔弗戈 尤文圖德 07/07/27
14 聖保羅 利斯菲 07/07/27
替補 注意：由於本期亞洲杯、芬超和巴甲無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/25..18：20
開售時間：07/07/23..09：30 停售時間：07/07/25..17：35 計獎時間：07/07/27..10：30
註：我中心將在此期彩票開售前確認帶「*」球隊名稱。

第07051期 亞洲杯 1 第07050期序號1負者* 第07050期序號2負者* 07/07/28
2 第07050期序號1勝者* 第07050期序號2勝者* 07/07/29
挪超 15 3 阿勒桑 桑德菲奧德 07/07/30
4 利勒斯特羅姆 奧德格陵蘭 07/07/30
5 利恩 費德列斯達 07/07/30
6 斯塔貝克 瓦勒倫加 07/07/30
7 斯托姆加斯特 布蘭 07/07/30
8 特羅姆瑟 羅森博格 07/07/30
9 維京 斯達 07/07/30
巴甲 15 10 格雷米奧 巴拉納競技 07/07/29
11 桑托斯 諾蒂卡 07/07/29
12 瓦斯科達伽馬 戈伊亞斯 07/07/29
13 科林蒂安 弗拉門戈 07/07/30
14 美洲 聖保羅 07/07/30

替補 巴甲 15 1 克魯塞羅 博塔弗戈 07/07/30
2 弗魯米嫩塞 費古埃倫斯 07/07/30
最早比賽開始時間：07/07/28..20：35
開售時間：07/07/26..09：30 停售時間：07/07/28..19：50 計獎時間：07/07/30..10：00

2、亞洲杯比賽有沒有賣足球彩票啊．

當然有了,競猜亞洲杯的足球彩票,不過是巴西甲級聯賽與芬超同時競猜.具體競猜的場次如下:
第07047期 亞洲杯1 烏茲別克 馬來西亞 07/07/14
2 沙烏地阿拉伯 印度尼西亞 07/07/14
3 中國 伊朗 07/07/15
4 巴林 韓國 07/07/15
瑞超 14 5 特雷勒堡 加爾斯 07/07/14
6 赫爾辛堡 哥德堡 07/07/15
巴甲 11 7 格雷米奧 帕爾梅拉斯 07/07/15
8 桑托斯 博塔弗戈 07/07/15
9 利斯菲 米涅羅競技 07/07/15
10 美洲 巴西國際 07/07/15
11 科林蒂安 聖保羅 07/07/15
12 克魯塞羅 戈伊亞斯 07/07/15
芬超 12 13 馬里漢姆 奧盧 07/07/15
14 VPS瓦薩 拉赫蒂 07/07/15
替補 注意：由於本期亞洲杯、瑞超、巴甲和芬超無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/14..18：20
開售時間：07/07/12..20：00 停售時間：07/07/14..17：35 計獎時間：07/07/16..10：00

第07048期 亞洲杯 1 印度尼西亞 韓國 07/07/18
2 沙烏地阿拉伯 巴林 07/07/18
3 馬來西亞 伊朗 07/07/18
4 烏茲別克 中國 07/07/18
瑞超 14 5 哈馬比 卡爾馬 07/07/19
巴甲 12 6 費古埃倫斯 利斯菲 07/07/19
7 米涅羅競技 美洲 07/07/19
8 巴拉納競技 尤文圖德 07/07/19
9 巴西國際 科林蒂安 07/07/19
10 諾蒂卡 克魯塞羅 07/07/19
11 聖保羅 弗魯米嫩塞 07/07/19
12 弗拉門戈 巴拉納 07/07/20
13 戈伊亞斯 格雷米奧 07/07/20
14 帕爾梅拉斯 桑托斯 07/07/20

替補 注意：由於本期亞洲杯、瑞超和巴甲無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/18..18：20
開售時間：07/07/15..20：00 停售時間：07/07/18..17：35 計獎時間：07/07/20..10：30

第07049期 亞洲杯 1 B組第一 * A組第二 * 07/07/21
2 A組第一 * B組第二 * 07/07/21
3 C組第一 * D組第二 * 07/07/22
4 D組第一 * C組第二 * 07/07/22
挪超 14 5 布蘭 斯塔貝克 07/07/23
6 費德列斯達 利勒斯特羅姆 07/07/23
7 奧德格陵蘭 斯托姆加斯特 07/07/23
8 羅森博格 維京 07/07/23
9 桑德菲奧德 利恩 07/07/22
10 斯達 阿勒桑 07/07/23
巴甲 13 11 美洲 巴拉納競技 07/07/22
12 尤文圖德 巴西國際 07/07/22
13 瓦斯科達伽馬 米涅羅競技 07/07/22
14 科林蒂安 諾蒂卡 07/07/23

替補 巴甲 13 1 克魯塞羅 聖保羅 07/07/23
2 弗魯米嫩塞 戈伊亞斯 07/07/23
最早比賽開始時間：07/07/21..18：20
開售時間：07/07/19..09：30 停售時間：07/07/21..17：35 計獎時間：07/07/23..10：00
註：我中心將在此期彩票開售前確認帶「*」球隊名稱。

第07050期 亞洲杯 1 第07049期序號1勝者* 第07049期序號2勝者* 07/07/25
2 第07049期序號3勝者* 第07049期序號4勝者* 07/07/25
芬超 14 3 洪卡 哈卡 07/07/25
4 赫爾辛基 邁帕 07/07/26
巴甲 14 5 巴拉納競技 克魯塞羅 07/07/26
6 戈伊亞斯 桑托斯 07/07/26
7 弗拉門戈 美洲 07/07/26
8 諾蒂卡 格雷米奧 07/07/26
9 費古埃倫斯 科林蒂安 07/07/26
10 巴西國際 巴拉納 07/07/26
11 帕爾梅拉斯 瓦斯科達伽馬 07/07/26
12 米涅羅競技 弗魯米嫩塞 07/07/27
13 博塔弗戈 尤文圖德 07/07/27
14 聖保羅 利斯菲 07/07/27
替補 注意：由於本期亞洲杯、芬超和巴甲無剩餘比賽替補，一旦出現需要替換比賽情況，則使用同期進行的其他比賽進行替換。
最早比賽開始時間：07/07/25..18：20
開售時間：07/07/23..09：30 停售時間：07/07/25..17：35 計獎時間：07/07/27..10：30
註：我中心將在此期彩票開售前確認帶「*」球隊名稱。

第07051期 亞洲杯 1 第07050期序號1負者* 第07050期序號2負者* 07/07/28
2 第07050期序號1勝者* 第07050期序號2勝者* 07/07/29
挪超 15 3 阿勒桑 桑德菲奧德 07/07/30
4 利勒斯特羅姆 奧德格陵蘭 07/07/30
5 利恩 費德列斯達 07/07/30
6 斯塔貝克 瓦勒倫加 07/07/30
7 斯托姆加斯特 布蘭 07/07/30
8 特羅姆瑟 羅森博格 07/07/30
9 維京 斯達 07/07/30
巴甲 15 10 格雷米奧 巴拉納競技 07/07/29
11 桑托斯 諾蒂卡 07/07/29
12 瓦斯科達伽馬 戈伊亞斯 07/07/29
13 科林蒂安 弗拉門戈 07/07/30
14 美洲 聖保羅 07/07/30

替補 巴甲 15 1 克魯塞羅 博塔弗戈 07/07/30
2 弗魯米嫩塞 費古埃倫斯 07/07/30
最早比賽開始時間：07/07/28..20：35
開售時間：07/07/26..09：30 停售時間：07/07/28..19：50 計獎時間：07/07/30..10：00

3、注冊域名後怎麼建網站？

建站過程：注冊域名——購買虛擬主機或雲伺服器（網站空間）——網站設計布局——製作建設——測試上線（把網站傳到虛擬主機空間里，訪問域名就可以正式訪問網站）——維護推廣。
其中，最重要的就是網站建設的過程。大致是可以分成7方面：

一，企業網站建設方案。方案包括了行業、競爭對手及用戶調研，這個環節必須有，因為這部分的調研分析是整個網站建設的基礎和方向。通過調研分析，定位網站，由此根據企業的具體情況進行方案的細化。
二，SEO方案。SEO方案是為後期網站SEO打基礎的，SEO已經成為很多企業必備的線上營銷手段，所以SEO方案對網站的重要性不言而喻。網站底層的SEO如果沒做好，等到網站上線再做SEO，可能會事倍功半。
三，所需物料協調、組織與搜集。物料包括很多，公司和產品相關的文案、圖片和視頻等等，讓網站「有血有肉」的，就是這部分內容。這也是吸引客戶的重要信息。這個環節往往需要幾個部門的通力協作，跨部門交流、推進效率、收獲成果都很耗精力。另外，圖片和視頻必須是高質量的，通常要設計師精修，模糊不清的圖片視頻很容易讓用戶反感。
四，網站頁面設計。在建設方案中，會有網站配色方案、設計風格等方向的確定，設計師需要根據這些方向，設計網站的頁面。
五，技術實施。網站技術的實現，就是技術大佬要乾的事了。
六，內部測試。內測，就是要測試網站是不是正常的，有沒有什麼問題~
七，網站上線。內測之後，網站沒問題就可以上線了。

4、影響木霉蛋白分泌途徑效率的生理和突變調控

在真核細胞中分泌蛋白進入內質網後，在伴侶分子、糖基化酶和氧化還原酶調控下進行折疊。正確折疊的蛋白被輸送到高爾基體，在這里進行蛋白修飾，然後被分泌到細胞外。過量表達的外源蛋白、非正確折疊蛋白、錯誤折疊蛋白、效率低下的分泌蛋白或其他有害的分泌蛋白的積累，嚴重影響蛋白的轉運和分泌，會對細胞產生壓力，比如分泌壓力，低產量蛋白或由於細胞接觸各種化學品，而抑制蛋白折疊、轉運等都會引起分泌壓力。

11.1.4.1 非折疊蛋白響應

非折疊蛋白響應（Unfolded Protein Response，UPR）是真核細胞蛋白分泌途徑中的一種重要調節機制，是細胞應對分泌壓力而出現的一種響應機制。內質網中未正確折疊的分泌蛋白能啟動UPR途徑（Hetz et al.，2009；Malhotra et al.，2007），當未正確折疊蛋白在內質網中累積時，編碼內質網折疊蛋白和伴侶分子的基因、編碼內質網相關蛋白降解途徑的基因和一部分轉運蛋白基因及糖基化相關基因將被誘導表達。研究發現T.reesei中UPR途徑及其激活機制與其他生物的既有相似又有不同之處。

當內質網中未正確折疊蛋白積累時，它們結合內質網中伴侶分子BiP，少量BiP與IRE1蛋白內質網膜上的IRE1蛋白綁定時，就會激活UPR途徑。IRE1蛋白激活時進行磷酸化。在T.reesei中過表達IRE1時，大量相關基因的轉錄水平提高，有pdi1，內質網伴侶分子基因bip1和lhs1，糖基化途徑基因pmi40，轉運通道基因sec61和脂類生物合成基因ino1。這說明UPR涉及很多基因。在T.reesei中表達抗體的Fab片段將會導致pdi基因表達的明顯上調，這可能是由於外源蛋白在內質網的積累引發UPR後造成的（Saloheimo et al.，1999）。T.reesei中編碼磷酸酶，使IRE1 蛋白去磷酸化，消除UPR響應的基因ptc2已經被克隆（Valkonen et al.，2004）。

介導UPR的蛋白是HAC1（Cox et al.，1996），T.reesei的hac1基因和構巢麴黴（Aspergillus nilans）hacA基因已經被克隆，發現激活UPR的是具有20個核苷酸的內含子拼接到hac1/A mRNA上（Saloheimo et al.，2003）。Hac1/A mRNA在5』端區大約有200個核苷酸被截斷，同時上游開放閱讀框架（uORF）從 mRNA 上脫離。這說明 T.reesei 中hac1/A是通過雙重機制誘導表達的，內含子剪接恢復成一個活躍的開放閱讀框，不使用常規翻譯開始位點的uORF，用另一個轉錄起始點替代。

細胞中感受未折疊蛋白的是一個ser/thr跨膜激酶Irelp，它能檢測到未折疊蛋白的聚集，並將信號傳遞到細胞核內，誘導UPR特異轉錄因子HAC1mRNA的非傳統性剪接。在UPR響應發生時，IRE1的N-端感受信號，並多聚化激活C端的蛋白激酶和RNase活性，然後進一步激活下游轉錄調控因子HAC1。VoIkonen（2003）克隆了T.reesei中的ire1基因，發現其與S.cerevisiae中的IRE1 功能同源，他同時在T.reesei中過表達ire1，發現ire1能誘導一些內質網伴侶分子和折疊酶的表達。

轉錄調控基因hac1可結合到UPR功能基因pdi1等基因的上游啟動轉錄。絲狀真菌中HAC1mRNA剪切過程是5』端區域被截短並除去20nt的內含子。HAC1因子入核後結合在UPR響應基因啟動子區的非折疊蛋白響應元件區域，促使UPR相關的折疊酶、伴侶分子和糖基化修飾酶等的表達，以實現對內質網壓力的響應。內質網壓力響應與內質網相關蛋白降解途徑（ER-Associated Protein Degradation，ERAD）是緊密相連的，ERAD可將錯誤折疊或未組裝的蛋白直接導入蛋白酶體被26 S巨大蛋白酶降解。

HAC1為UPR途徑中重要的調控轉錄因子，當蛋白質在內質網積累，跨膜感受器將刺激信號傳遞給HAC1，然後激活UPR途徑，提高分子伴侶和折疊酶的表達。在UPR途徑中具有重要作用。HACA屬於bZIP型家族的轉錄因子，它在DNA結合結構域下游含有一個典型的亮氨酸二聚體基序結構。研究顯示，hac1及其靶基因pdi1，bip1（編碼二硫鍵異構酶、蛋白折疊伴侶）在低生長速率下出現誘導轉錄，說明低生長速率下蛋白分泌受到了限制（Pakula et al.，2005）。而且，pdi1，bip1的轉錄也與纖維素酶基因一起受到乳糖、槐糖的誘導（Foreman et al.，2003）。這都說明，即使不添加外源蛋白折疊抑制劑（例如二硫蘇糖醇DTT），蛋白分泌壓力的提高也可使蛋白折疊過程做出應答。同樣，在T.reesei中hac1/hacA基因也通過一個由UPR誘導的非常規內含子的剪切機制進行剪接（Saloheimo et al.，2003）。這些實驗結果都顯示在絲狀真菌中表達外源蛋白將會造成UPR響應並使相應的伴侶分子和折疊酶的表達上調，目前的研究表明這些變化是由上游的IRE1和HAC1調控的。

最近，在研究蛋白折疊和分泌抑制劑對T.reesei的影響時，發現一種新的分泌壓力響應機制（Pakula et al.，2003）。該途徑在有分泌壓力時發揮作用，下調一些基因的轉錄水平。只有正確折疊的蛋白被轉運到高爾基體，進一步修飾，調整蛋白的功能和穩定性。用DTT，BFA或者能打破Ca2+平衡並抑制蛋白折疊或者蛋白轉運出內質網的A23187處理細胞時，纖維素酶和木聚糖酶主要編碼基因的轉錄水平迅速降低，導致這些蛋白合成量迅速降低。當用DTT處理攜帶標記基因的完整cbh1啟動子或在上游161位點斷裂的cbh1啟動子的菌株時，標記基因的mRNA量並沒有減少，這說明基因調控發生在轉錄水平，並在上游161位點以後。這種分泌壓力響應機制只在 T.reesei和A.niger 中被檢測到（Al-Sheikh et al.，2004），這點不同於其他絲狀真菌。這種新的途徑被稱為RESS（REpression under Secretion Stress），認為內質網中在基因轉錄水平終止新蛋白合成，處理未折疊蛋白的另一種新方式。目前已經有400餘個和蛋白分泌壓力響應有關的基因被鑒定。

11.1.4.2 突變體

Suh等（1986）和Byers（1981）在嘗試分離T.reesei的溫度敏感型突變體時發現sec突變體的分離程序基於酵母的單細胞特點，而不適合於多細胞的生物體。在一系列ts突變體中，共有兩大類型：突變體為溫度敏感型的，在37℃能生長；突變體能在37℃正常生長但其萌發需在25℃。b類突變體在37℃分泌的蛋白質量很少。但是，與酵母的sec突變體不同，生長對溫度的敏感性與蛋白分泌障礙之間沒有直接關聯。當有2-脫氧葡萄糖存在時，T.reesei的一些突變菌株可以在纖維二糖為碳源時產生纖維素酶，而這些突變菌株是超分泌型的，例如菌株 RUT C-30和RL-P37（Eveleigh et al.，1979；Mandels et al.，1976；Merivouri et al.，1987）。當初使用這種篩選方法的目的是想得到碳源分解物阻遏型的突變菌株［在基因水平上已被Ilmen等（1996）所證實］，但生物化學研究表明，這些突變體中也發生了其他一些變化，包括粗糙內質網及粗糙內質網衍生的泡囊等細胞結構的大量增加（Ghosh et al.，1982，1984）。另外，通過亞細胞組分分析，在T.reesei突變體RUT C-30的增生內質網上還發現了一些酶的活性（Glenn et al.，1985），這些酶一般存在於其他真核生物的高爾基體中。由此可以判斷T.reesei菌株RUT C-30是一個內質網發生突變的菌株。在功能上，現在還不知道該突變是否與碳源分解物阻遏基因cre1相關（Ilmen et al.，1996）。

魏松環等（2009）克隆了T.reesei內質網壓力響應途徑中的調控蛋白基因hac1和分子伴侶基因hsp70，成功地進行了T.reesei轉化。對表達hsp基因的轉化子T47-hsp和T112-hsp的胞外分泌蛋白總量進行了檢測，相對於各自的出發菌株 T47和T112，T47-hsp和T112-hsp的胞外蛋白分泌總量有一定程度降低，但對胞外分泌蛋白CBHI活力測定結果顯示：T47-hsp和T112-hsp菌株 CBHI 酶活均比出發菌株有提高，說明過量表達分子伴侶HSP70可提高內源蛋白的分泌量。

液泡蛋白分選受體基因vps10編碼類型I跨膜受體蛋白，有四個保守結構域，是完成運輸功能所必需的。通過與GFP融合表達觀察到Vps10p主要位於高爾基體和液泡前體。盡管Vps10p能夠識別幾種重組體蛋白及異常蛋白並靶向運輸至液泡降解，但是它對外源蛋白的產量的影響尚被知之甚少。為了研究里氏木霉（T.reesei）蛋白分泌途徑中的液泡蛋白分選受體vps10 基因的功能，於海娜（2011）利用基因敲除技術構建了里氏木霉（T.reesei）vps10基因缺失菌株，並對其進行了生長和產酶分析。發現基因缺失菌株的生長狀態與野生型菌株基本一致，生物量略有提高，對纖維素酶的分泌影響不顯著。在Yoon（2010）最新的研究中，在米麴黴（Aspergillus oryzae）中破壞AoVps10基因，使外源蛋白CPY和HLY產量分別提高了3倍和2.2倍。這是首次關於破壞一個液泡分選受體基因而導致外源蛋白產量提高的報道。

11.1.4.3 細胞膜和細胞膜組分對木霉蛋白分泌途徑的影響

有些絲狀真菌，如果向培養基中加入去污劑例如吐溫-80，脂肪酸或者磷脂，其產酶能力能夠得到提高（Reese et al.，1969，1971）。這種效應的生物化學基礎，應是通過刺激分泌途徑中的限制性環節表現出來的，向T.reesei培養基中加入膽鹼或者吐溫80，都能夠促進質膜增長及蛋白質的分泌（Schreiber et al.，1986）。另外，電子顯微鏡檢查、化學成分分析及標志性酶分析表明，含膽鹼培養基中生長的木黴菌絲中線粒體和內質網的含量也比對照有增加。因此，膽鹼對蛋白質分泌的促進效應，可能與蛋白分泌有關的細胞結構「瓶頸」存在關聯，其機理與RUT C-30突變有一定程度的相似性。用脂肪酸處理也能促進蛋白質的分泌，其過程和機理與此相似（Panda et al.，1987）。

小泡在分泌途徑的各個步驟中都起著重要作用，因此，質膜的流動性也應在蛋白質的分泌中有一定影響。為了證明這個假設，有人研究了一些影響質膜完整性或者流動性的因子。Merivouri等（1987）發現，2%（v/v）的乙醇能夠抑制 T.reesei 超分泌型菌株 RL-P37的纖維素酶分泌，但對其親本菌株沒有影響。令人感興趣的是，分泌蛋白的糖基化方式也因為乙醇的加入而發生改變。但也有不同的報道，Haab等（1993）發現T.reesei RUT C-30的蛋白分泌對乙醇的耐受性顯著高於親本菌株。對乙醇耐受性的這種差異在糖基化蛋白（CBHI和CBHII）及非糖基化蛋白（木聚糖酶Ⅱ）中均被發現，表明乙醇不影響糖基化相關步驟。Northern分析表明，乙醇還能減少纖維素酶mRNA的數量，因此能夠干預纖維素酶基因的轉錄。這些研究者解釋，對乙醇的高度耐受性源於細胞質膜固醇成分的改變，而這種改變又與篩選突變體時所用培養基中含有膽酸有關。Gorka-Niec等（2010）發現1M山梨糖醇對T.reesei蛋白質分泌有很大影響，減少將近10倍分泌量。

分泌蛋白和膜蛋白是通過依賴SNAREs的胞外分泌途徑到達質膜，SNAREs的作用是保證介導運輸小泡與目標膜特異融合，位於運輸小泡上的叫作v-SNAREs，而位於靶膜上的為t-SNAREs。v-SNAREs和t-SNAREs 特異性識別結合後形成 SNAREs 復合體（trans-SNAREs Complexes），並通過這個結構將運輸小泡的膜與靶膜拉在一起，實現運輸小泡特異性停泊和融合。T.reesei 具有兩個質膜突觸融合蛋白樣 t-SNAREs受體-Ssolp和Sso2p，Ssolp與次頂端質膜上的受體v-SNARE Snclp結合而Sso2p則與頂端質膜上的受體Snclp結合，考慮到菌絲的生長區主要在頂端，Sso2p可能主要含有與菌絲的頂端生長有關的物質例如細胞壁合成的酶類，而Sso1p則負責水解酶類及膜蛋白的運輸。

液泡蛋白在高爾基體中被分選出來並通過內含體運輸到液泡中，液泡對維持細胞質流動性、蛋白水解、分選及細胞間的轉運有重要的作用。

胞外分泌物質和膜蛋白都是通過內吞作用實現的，內吞的蛋白在早期的內涵體內被分選出來，經過反向循環被帶到質膜，或者通過晚期的內涵體進行降解。v-SNARE Snclp就是一種最後經過反向循環又回到質膜的蛋白，內吞泡對維持胞外蛋白的分泌和膜質的極性又有非常重要的作用，雖然其間接作用於蛋白的分泌過程，卻起著關鍵作用。

11.1.4.4 碳源、pH、溫度等環境因素對木霉蛋白分泌途徑的影響

Suarez等（2005）研究了分別以幾丁質、其他真菌細胞壁為碳源時，T.harzianum的分泌蛋白質表達情況。研究發現，在不同的培養條件下胞外蛋白組存在顯著差異，但一種新型的天冬氨酸蛋白酶的表達量是最高的，因而猜測這種蛋白質在其腐生生活中起主要作用。研究結果還發現，兩個菌株除了在分泌量上的差異之外，纖維素酶的組成上有明顯的差異。T.reesei CL847分泌至胞外的蛋白種類較多，而T.reesei RUT C-30 則傾向於只分泌纖維素酶。Monteiro（2010）分別在含有菜豆殼球孢菌（Macrophomina phaseolina），鐮刀菌（Fusarium spp.）和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）病原真菌細胞壁的培養液中培養T.harzianum ALL42，提取胞外蛋白。經雙向蛋白電泳和基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）技術檢測分析，在這3種培養液中共發現60種分泌蛋白，其中7種蛋白是細胞壁誘導蛋白，分別是內切幾丁質酶、β-葡糖苷酶、a-甘露糖苷酶、酸性磷酸酶、a-1，3葡聚糖酶和蛋白酶，這些酶在培養液上清中也能被檢測到。其餘53種蛋白未鑒定出來，可能是新蛋白或是還未被測序的蛋白。

伍紅（2011）發現T.reesei QM9414在發酵培養過程中的胞外分泌蛋白的總量變化與其培養液中碳源的成分有著密切的關系。在纖維素、木聚糖、乳糖、甘油、葡萄糖等不同碳源條件下培養QM9414，對纖維素酶、木聚糖酶的活性差異及其培養液中總分泌蛋白的表達差異進行了分析。發現纖維素、乳糖和木聚糖均可誘導纖維素酶和木聚糖酶的合成；而葡萄糖是兩種酶合成的抑制性碳源。其中，以纖維素和乳糖為碳源的培養液中，蛋白合成的速度及總量都顯著高於其他碳源，其次是以木聚糖為碳源的培養液，再其次是甘油為碳源的培養液，蛋白質合成速度及總量都很低的是葡萄糖為碳源的培養液，說明碳源對T.reesei蛋白質合成代謝的調控作用很明顯。纖維素、乳糖、木聚糖都可以誘導胞外分泌蛋白質基因表達。從蛋白合成總量來看，纖維素和乳糖的誘導能力強於木聚糖，與以前的報道一致（Suto et al.，2001；凌敏等，2009）。柳常青（2009）發現T.reesei在以葡萄糖或甘油為碳源時僅 CBHII，BXL和AxeI 3種纖維降解酶有微量表達，這3種酶可能是T.reesei組成型表達的纖維降解酶。纖維二糖能夠誘導CBHI，CBHII，EGI，EGIII，BXL，AxeI和AglI 較高水平的表達。纖維素紙漿可誘導 CBHI，CBHII，EGI，EGII，EGIII，EGIV，ManI，ManII，AxeI，BXL和AglI等11種酶的大量表達，表達量佔分泌組的61%。纖維素誘導的纖維降解酶組分比例情況與纖維二糖條件很相似，但表達量和酶活性都有顯著上升。不少報道也證明了這點（Wrleitner et al.，2003；Mach et al.，1996）。

除了碳氮源外，pH是影響微生物產酶量的主要因素，它對代謝通路、工業產酶量和酶合成效率都有影響。據報道，T.reesei在不同pH時的蛋白分泌量有很大變化。Sunil等（2011）發現 T.reesei 野生菌株（QM6 a）及其突變體（QM9414，RUT C-30，QM9414MG5）這4個菌株中，纖維素水解酶包括纖維素內切酶、外切葡聚糖酶、β-葡糖苷酶在不同pH培養基中表達水平都有變化。對在不同pH培養基中特異表達的蛋白進行聚類分析，發現 T.reesei 野生菌株（QM6 a）及其突變體（QM9414，Rut-C30，QM9414MG5）分泌酶類所佔比例相似，但明顯隨著pH的變化和菌株的不同而表達量不同。在pH為9.0時，T.reesei菌株QM6 a和RUT C-30降解纖維素效率明顯降低，具有較低的酶活性，細胞生長速度明顯降低；RUT C-30菌株在pH為4.0時纖維二糖水解酶I和外切葡聚糖酶Ⅱ的蛋白豐度最大，這表明這兩種酶的表達水平最高；而內切葡聚糖酶Cel74a，β-1，3-葡聚糖酶，β-葡聚糖酶等蛋白在pH為5.0時表達量最高；在pH在3～5之間時纖維素水解蛋白的豐度明顯較高，纖維素降解能力相應增強。半纖維素水解酶包括GH11內切1，4-β-木聚糖酶、GH11木聚糖酶III、GH54 阿拉伯呋喃糖酶、GH5β-甘露聚糖酶、GH43木糖酶/阿拉伯糖苷酶，GH39 β-木糖酶、GH5 內切β-1，6-半乳聚糖酶、植酸酶等在不同pH環境中都能檢測到。pH在3.0～7.0 范圍內T.reesei和突變體產半纖維素降解酶量並沒有受到明顯影響，在酸性條件下，半纖維素水解蛋白的分泌量最大。木聚糖酶Ⅰ～Ⅳ中木聚糖Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分別在pH為4.0～4.5，4.0～6.0和6.0～6.5時分泌量最大（Tenkanen et al.，1992 a；Torronen et al.，1995；Xu et al.，1998；Sunil et al.，2011）。在鹼性條件下各類纖維素酶、半纖維素酶、木質素降解蛋白、肽酶、幾丁質酶和運輸蛋白的分泌量均受到顯著影響。

在木黴菌株培養過程中，經常是碳源與培養基的pH協同作用於木黴菌的蛋白分泌表達，Bailey等（1993）發現T.reesei RUT C-30在pH為7.0時木聚糖酶分泌量最大，而在以纖維素和木聚糖作為主要碳源時纖維素酶在pH為4.0時分泌量最大。Xiong等（2004）報道T.reesei在乳糖培養基中培養時，木聚糖酶I在pH為4.0、木聚糖酶Ⅱ在1 pH為6.0時分泌量達到最大。

培養溫度對木霉纖維素酶的分泌量來說很重要，而且溫度效應具有菌株特異性。Merivouri等（1990）發現在28℃培養時，T.reesei RUT C-30的纖維素酶產量為親本菌株的3倍，而在30℃培養時則僅為2倍。利用酶活性分析及電泳技術發現，溫度的升高能夠減少纖維素酶但能增加木聚糖酶的分泌量，這種效應對T.reesei親本菌株QM9414和突變菌株RUT C-30來說是相似的。T.reesei QM9414 內切葡聚糖酶的分泌速率在17℃培養時提高，接近菌株 RUT C-30在 28℃培養時的分泌速率。Suh等（1986，1988）比較了T.reesei QM6 a和T.reesei RL-P37在25℃，30℃和37℃培養時的木聚糖酶和內切葡聚糖酶分泌情況，發現低產量菌株QM6 a在較高溫度培養時蛋白質分泌量下降，但菌株RL-P37的產量卻有所提高；但兩個菌株的木聚糖酶活性在高溫培養時都得到了提高。

11.1.4.5 細胞壁在蛋白質結合與釋放中的作用

在快速生長期，真菌的許多胞外蛋白質在分泌以後結合在細胞壁上，木霉的一些分泌型蛋白質也存在這種現象。Kubicek（1981，1982，1983）利用β-葡糖苷酶作為模式，研究了木霉分泌型蛋白與細胞壁的結合情況，發現分泌型酶總活性的80%與細胞壁有關聯（Kubicek，1981），細胞壁也是限制商業纖維素酶產量的因素。β-葡糖苷酶對細胞壁的結合程度與細胞壁成分及更新動態有關。與β-1，3-葡聚糖酶或者幾丁質酶共培養時，β-葡糖苷酶能夠釋放出來，如果木霉細胞壁中含有高水平的β-1，3-葡聚糖酶，總β-葡糖苷酶分泌量增加的部分即出現在培養液上清中（Kubicek，1982）。另外，在山梨糖（同質異形誘變劑）存在時，木霉在生長過程中向培養液中的釋放β-葡糖苷酶量可被提高（Ku-bicek，1983；Nanda et al.，1986），已知山梨糖能夠抑制β-1，3-葡聚糖的合成。這些研究結果都支持如下假設：即細胞壁中的β-1，3-葡聚糖組分參與β-葡糖苷酶對細胞壁的結合。然而，在細胞壁酶解過程中，細胞壁中仍有多糖與β-葡糖苷酶緊密結合，通過對這些細胞壁多糖成分的純化分析，發現β-葡糖苷酶與復雜的異型多糖有關聯，這些多糖由甘露糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸組成（Messner et al.，1990a）。有趣的是，這種異型多糖在細胞壁中能夠結合β-葡糖苷酶，但在體外則能夠激活β-葡糖苷酶。經過核磁共振技術（NMR）分析，發現這種能夠激活β-葡糖苷酶的異型多糖結構骨架為線形的a-1，6-D-甘露聚糖（Rath et al.，1995）。

Perlińska-Lenart等（2006a）將釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）編碼長醇基一磷酸甘露糖合成酶的dpm1基因轉到T.reesei中獲得超量表達，結果提高了蛋白質糖基化強度和分泌量，而且引起了木霉細胞壁的超微結構變化。在化學組成方面，細胞壁中的N-乙醯基葡萄糖的含量增加，暗示幾丁質含量提高，用熒光增白劑（Calcofluor White）染色後發現幾丁質在細胞壁中的分布也發生了改變。還發現甘露糖及鹼溶性β-1，6葡聚糖的含量減少。通過比較原生質體與菌絲的蛋白分泌情況，發現轉化子的細胞壁是蛋白分泌的一道屏障，阻礙了蛋白分泌。分泌蛋白糖基化水平的提高，減少了核糖量，從而限制了細胞壁多糖的合成，但甘露糖及鹼溶性β-1，6葡聚糖的含量減少又使得細胞壁的孔隙率提高，反而有利於蛋白質的分泌。

5、真正的黑客到底是什麼樣子的呢？

我覺得真正的黑客並不是那種憑著自己技術高超而去損害其他人的利益的人。

黑客：黑客指精通操作系統和網路技術的人群，熱衷於科技探索及極限技術的研究。使用技術發現網路上的漏洞故障，善意的提醒給相關運營方，或者是對網路進行安全維護，對整個互聯網帶來良性的影響。

黑客相信其他黑客的思考時間是寶貴的 — 因此共享信息、解決問題、並發布結果給其他黑客幾乎是一種道義，這樣其他人就可以去解決新問題，而不用在舊問題上面浪費精力了。

黑客（以及所有創造力的人們）都不應該被愚蠢的重復性勞動所困擾。重復性勞動浪費了他們解決新問題的時間，而解決新問題正是黑客最大的價值所在。這種浪費會傷害到每一個人。無聊和乏味的工作不僅僅是令人不舒服而已，而且本身就是一種罪惡。黑客堅信這點並盡可能多地將乏味的工作自動化，這不僅是為了你自己，也是為了其他人（尤其是其他黑客們）。