1、求問，用掃描電鏡拍的微生物怎麼鑒別
微生物樣品的乾燥
掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液，在高真空中都會產生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會破壞樣品的微細結構。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進行乾燥。乾燥的方法有以下幾種：
(一) 空氣乾燥法
空氣乾燥法又稱自然乾燥法，就是將經過脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發乾燥。這種方法的最大優點是簡便易行和節省時間；它的主要缺點是在乾燥過程中，組織會由於脫水劑揮發時表面張力的作用而產生收縮變形。因此，該方法一般只適用
於表面較為堅硬的樣品。
(二) 臨界點乾燥法
臨界點乾燥法是利用物質在臨界狀態時，其表面張力等於零的特性，使樣品的液體完全汽化，並以氣體方式排掉，來達到完全乾燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響，較好地保存樣品的微細結構。此法操作較為方便，所用的時間也不算長，一般約2～3小
時即可完成，所以是最為常用的乾燥方法。但用此法，需要特殊儀器設備。
臨界點乾燥是在臨界點乾燥儀中進行的，操作步驟如下：
1．固定、脫水：按常規方法進行。如樣品是用乙醇脫水的，在脫水至100%後，要用純丙酮置換15～20分鍾。
2．轉入中間液：由純丙酮轉入中間液醋酸異戊酯中，時間約15～30分鍾。
3．移至樣品室：將樣品從醋酸異戊酯中取出，放入樣品盒，然後移至臨界點乾燥儀的樣品室內，蓋上蓋並擰緊以防漏氣。
4．用液體二氧化碳置換醋酸異戊酯：在達到臨界狀態(31(C , 72.8大氣壓)後，將溫度再升高10(C，使液體二氧化碳氣化，然後打開放氣閥門，逐漸排出氣體，樣品即完全乾燥。
(三) 冷凍乾燥法
冷凍乾燥法是將經過冷凍的樣品置於高真空中，通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。冷凍乾燥的基礎是冰從樣品中升華，即水分從固態直接轉化為氣態，不經過中間的液態，不存在氣相和液相之間的表面張力對樣品的作用，從而減輕在乾燥過程中對樣
品的損傷。冷凍乾燥法有兩種，即含水樣品直接冷凍乾燥和樣品脫水後冷凍乾燥。
1．含水樣品直接冷凍乾燥法
1.1 取材固定：按常規方法進行。
1.2 置於冷凍保護劑中：將樣品置於冷凍保護劑中浸泡數小時。常用的冷凍保護劑為10%～20%二甲基亞碸水溶液，或15%～40%甘油水溶液。
1.3 驟冷：將經過保護劑處理的樣品迅速投入用液氮預冷至(150(C的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結。
1.4 乾燥：將已凍結的樣品移到冷凍乾燥器內已預冷的樣品台上，抽真空，經幾小時或數天後，樣品即達到乾燥。
本方法不需要脫水，避免了有機溶劑對樣品成分的抽提作用，不會使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由於花費時間長，消耗液氮多，容易產生冰晶損傷，因此未被廣泛應用。
2．樣品脫水後冷凍乾燥
樣品用乙醇或丙酮脫水後過渡到某些易揮發的有機溶劑中，然後連同這些溶劑一起冷凍並在真空中升華而達到乾燥。和前一種方法比較，本方法的優點是不會產生冰晶損傷，
且乾燥時間短。不足之處是有機溶劑對樣品成分有抽提作用，造成部分內含物丟失。乙腈(acetonitrile)真空乾燥法：這是一種利用乙腈在急速蒸發時會冷卻固化的性質將樣品乾燥的方法。其操作步驟如下：
(1). 固定、水洗：按常規方法進行。
(2). 乙腈置換：使用50%?70%?80%?90%的乙腈水溶液置換，最後用100%乙腈代替，每步驟15～20分鍾。
(3). 乾燥：至純乙腈時，放入真空鍍膜台抽真空，乙腈和樣品在真空中很快致冷而被凍結(凍結的溫度為(45(C)，變成冰狀固體。然後繼續抽真空，使凍結的乙腈升華，約需30分鍾，樣品即達乾燥。
樣品乾燥後要粘在樣品台上。對於不鍍膜而直接觀察的樣品，必須用導電膠來粘固；對於要鍍膜的樣品，則可以用膠水或萬能膠來代替，微細的樣品如粉末、纖維等也可用雙面膠紙來粘貼。
2、怎麼測微生物呼吸
1.取兩瓶水，通入足量氧氣，這樣水裡就溶解一定量的氧，並密封。
2.其中一瓶滴加微生物進去，兩瓶都放置黑暗中靜置一段時間。
3.兩瓶都滴加氯化亞鐵淺綠色溶液，再搖勻密封靜置。
4.可以發現，有加微生物的，淺綠色不變，
5.沒加微生物的，淺綠變黃褐色。
6.解答，淺綠的氯化亞鐵會和水裡的氧反應，亞鐵離子氧化成黃褐色的鐵離子，微生物把水裡的氧呼吸消耗了，所以淺綠不會變。
3、自己配製的培養液經微生物處理後怎麼測氨氮
1,培養液中微生物去除法：（1）離心,適用於菌體量大,濃度高,高速離心可以與水分離開的.
（2）微孔過濾膜過濾,適用於微生物量微少的液體.必須要選擇孔徑小的,在幾個微米一下的濾孔.
2,去除微生物之後的培養液氨氮分析法：（1）試劑盒＋檢測器,通關硝化反應處理,來分析,一般採用的檢測器是分光光度型,專門用於分析N含量的,具有吸收峰出現.（2）凱氏定氮法,選用凱氏定氮儀做,較方便些,如果沒有,實驗室按反應步驟做也可以,先硝化、氨化吸收,再滴定.
4、生物中檢測微生物用什麼意思方法
生長量測定法
體積測量法：又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鍾）和轉速（如5000 rpm），離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。
稱乾重法：
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1-5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在1050C或1000C下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在800C或400C下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在400C下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
比濁法：
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm 處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.Coli的生長及誘導時間。
菌絲長度測量法：
對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長。
微生物計數法
血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
染色計數法：
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
比例計數法：
將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
液體稀釋法：
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
平板菌落計數法：
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。
試劑紙法：
在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
膜過濾法：
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
生理指標法：
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。
測定含氮量：
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
測定含碳量：
將少量（乾重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。
還原糖測定法：
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。
氨基氮的測定：
方法是，離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。
其他生理物質的測定：
P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙醯胞壁酸）等含量以及產酸，產氣，產CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產熱等指標， 都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。
商業化快速微生物檢測法：
微生物的檢測，其發展方向是快速，准確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：
1、抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。中科院廣州分院合作產業處提供的抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於多項檢測。
2、BACTOMETER 全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果，樣本顏色及光學特徵都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。
5、求助，微生物，大家做冷場掃描電鏡的樣品都是怎麼做的
冷場：做完測試關燈絲，需要做Cleaning，燈絲束流亮度較低，成像質量較好，不適合做EDS。熱場：燈絲常亮，不需要清潔維護，燈絲亮度高，成像效果較好（相同等級的熱場FESEM成像效果略遜色於冷場FESEM），EDS效果遠優於冷場。
6、土壤微生物數量的測定方法
取一定重量的土壤，稱取1g，置於100ml無菌水中，充分振盪，然後離心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部轉移至水中）。然後做梯度稀釋，取一定稀釋度的溶液，塗平板，培養後數菌落數，然後乘上稀釋倍數，就可得到1g土壤中該微生物的數量。
例如，你在稀釋10的7次方的平板上數出了15個菌落，則1g土壤中微生物數量為1.5×10的8次方個。
7、微生物檢查法的陽性對照溶液要怎麼做？
要是做陽性對照的話，沒有必要做什麼對照溶液，只需要傳代好你的工作菌株。每次用的時候，或者做陽性對照的時候就拿出來，用合適的培養基復甦，然後跟樣品一起做一樣的實驗就可以了
8、如何測定微生物的數量
紅細胞計數法是用顯微計數板來在顯微鏡下計算紅細胞的密度。
平板劃線法是分離微生物的方法，並不是計數方法。
稀釋塗布法是用來計數的。
9、微生物中細菌檢測
可以將樣品稀釋成溶液，然後劃在培養皿上培養，過一段時間後看菌落的分布狀況，可以大概區分出有幾種細菌和各種細菌所佔比例。